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用 cAMP-Gs HiRange HTRF 法检测 GPCR 活性

上传人: 美谷分子仪器(上海)有限公司 |大小:790.29KB|浏览:21次|下载:0次|时间:2022-07-08
用 cAMP-Gs HiRange HTRF 法检测 GPCR 活性
文档简介

HTRF® 是由 Cisbio 开发的用于检测生物分子相互作用的通用技术。它将荧光共振能量转移 (FRET) 技术与荧光的时间分辨(TR) 测量相结合,可以消除短寿命的背景荧光。该测定使用供体和受体荧光团,它们用于标记要研究其结合的蛋白质或其他生物分子。 当两个生物分子相互结合时,供体和受体就靠
在一起了。能量源 ( 例如闪光灯 ) 对供体的激发触发能量转移到受体,受体继而在给定波长发射特定荧光。
HTRF 使 用四种特定的荧光团,它们可以组合形成相容的供体 - 受体 TR-FRET 对。 供体是穴状铕 (Eu3+) 和铽穴状化合物(Lumi4 ™ -Tb),它们的长寿命荧光使其可用于时间分辨荧光分析。已经开发了两种受体用于 HTRF 分析,XL665 和 d2。两者的激发光谱都与 HTRF 供体的发射光谱重叠,在 665 nm处的发射峰落在供体不显著发射的区域内。最初的 HTRF 受体 XL665 是一种从红藻中纯化的藻胆蛋白色素。 第二代受体d2 是改良的别藻蓝蛋白,比 XL665 小 100 倍,旨在缓解基于XL665 的检测可能出现的空间位阻问题。
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